1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算；3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。

(相关资料图)

2、扩展资料：PVR的循环参数：预变性；模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。

3、2、变性步骤；循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。

4、变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。

5、3、引物退火；退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。

6、然后在此次实验基础上做出预估。

7、退火温度对PCR的特异性有较大影响。

8、4、引物延伸；引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。

9、但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

10、5、循环数；大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。

11、6、最后延伸；在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。

12、参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR。

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